U.R.2 - Università degli Studi della Tuscia, Viterbo

L'U.R.2 dell'Università della Tuscia partecipa al Progetto RAP-BiG con un Professore Associato e un Assegnista di Ricerca del DIBAF.

Le attività dell’U.R. 2 verteranno sulla caratterizzazione biologica degli estratti preparati con NADES o con solventi e procedure convenzionali. Questo contribuirà a definire le proprietà funzionali degli estratti e le potenziali applicazioni in diversi campi.

Saranno svolte attività citotossiche e antiproliferative su linee cellulari umane, che rappresentano i modelli di studio in vitro migliori per diversi tipi di malattie, come le cellule di adenocarcinoma mammario (MCF-7 e MDA), il neuroblastoma (SH-SY5Y), l'adenocarcinoma colon-rettale (Caco-2) e la leucemia acuta (CCRF-CEM e HL60). Come controllo verrà utilizzata una linea cellulare normale (MCF 10A). Il primo approccio valuterà gli effetti degli estratti e delle frazioni sulla vitalità cellulare utilizzando il saggio MTT.

Gli effetti antinfiammatori degli estratti saranno studiati anche nella linea cellulare Caco-2 mediante citometria a flusso focalizzata sulla secrezione di citochine e sulla sintesi di Interleuchina-8 (IL-8), Interleuchina-1ß (IL-1ß), Interleuchina-6 (IL-6), Interleuchina-10 (IL-10), Fattore di necrosi tumorale (TNF) e Interleuchina-12p70 (IL-12p70). Inoltre, le alterazioni morfologiche indotte nei modelli cellulari saranno valutate mediante microscopia ottica, a fluorescenza e al microscopio elettronico a trasmissione e scansione. Anticorpi contro specifiche proteine e coloranti fluorescenti per bersagli cellulari saranno utilizzati in metodologie di immunofluorescenza e tecniche di microscopia elettronica definiranno le interazioni cellula-cellula e le alterazioni morfologiche e ultrastrutturali dei componenti cellulari.

Sarà inoltre studiata l'attività antibatterica nei confronti di alcuni batteri ambientali e patogeni, utilizzando cinque diversi ceppi di batteri ambientali e Erwinia amylovora come batterio fitopatogeno, definendo per ognuno di essi la Concentrazione Minima Inibitoria (MIC) e la Concentrazione Minima Battericida (MBC), secondo le linee guida del Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI).